🔬 Гистология и патоморфология

Калькулятор гистологии

Подсчёт клеток и митозов, Ki-67, площадь срезов, таймеры окраски H&E / PAS / Массон / ИГХ, время фиксации формалином, разведение антител и справочник типов тканей — всё в одном инструменте.

Митотический индексKi-67 пролиферацияH&E, PAS, Маccон, ИГХВремя фиксацииРазведение антителТипы тканей

Калькулятор гистологии

Подсчёт клеток, Ki-67, митотический индекс, протоколы окраски, фиксация, антитела, типы тканей

Подсчёт клеток на поле зрения

Всего подсчитано клеток

Число полей зрения

Объектив микроскопа

Площадь поля (своя, мм²)

мм²

Ср. клеток/поле

—

Всего клеток

—

Плотность клеток

—

Площадь поля: 0.1590 мм²

Формула: Плотность = Σ клеток / (N полей × площадь поля). При объективе ×40 диаметр поля ~0,45 мм, площадь ~0,159 мм².

инструментов

Подсчёт, Ki-67, МИ, таймеры, фиксация, антитела, стереология, ткани

протокола окраски

H&E, PAS, Массон, иммуногистохимия с таймером

17+

типов тканей

Эпителий, соединительная, мышечная, нервная с ИГХ маркерами

0₽

бесплатно

Без регистрации, без ограничений

Основы гистологии: что нужно знать

🔬

Морфометрия

Морфометрия — количественная оценка гистологических структур. Включает измерение площадей, объёмов, длин и числа клеток. Современные системы анализа изображений (QuPath, ImageJ, Halo) автоматизируют подсчёт, снижая субъективность. Стандарты морфометрии определены руководствами ISAC и WHO.

🧬

Пролиферативная активность

Оценивается по митотическому индексу и Ki-67. Эти показатели входят в международные классификации злокачественности: Grade опухоли молочной железы (Bloom-Richardson-Elston), NET WHO 2019, GIST AFIP критерии. Ki-67 >14% при раке молочной железы — критерий chemotherapy benefit.

🧪

Иммуногистохимия (ИГХ)

ИГХ выявляет специфические антигены в тканях с помощью меченых антител. Системы детекции: EnVision (Dako/Agilent), UltraView (Ventana), Bond Polymer Refine (Leica). Стандартный хромоген — DAB (коричневый). Результат оценивается по H-Score, Allred Score, системе 0–3+ (для HER2).

📐

Стереология

Стереология позволяет из 2D-срезов получать 3D-параметры: объём, площадь поверхности, длину. Принцип Делесса (1847): Vv = Pp = Aa. Cavalieri principle используется для оценки объёма органов. Stereologer и Stereo Investigator — профессиональные программы для нейронаук и патологии.

Гистология в клинической практике

Степень злокачественности и пролиферация

Система Bloom-Richardson-Elston (модификация Elston-Ellis) для рака молочной железы оценивает три параметра по 1–3 балла: ядерный полиморфизм, формирование трубочек и митотический индекс. Суммарный балл определяет grade: G1 (3–5 баллов), G2 (6–7), G3 (8–9). Митотический индекс при G1: ≤5/10 HPF, при G3: ≥11/10 HPF (поле ×40, диаметр 0,45 мм).

Нейроэндокринные опухоли (ВОЗ 2019): G1 — Ki-67 <3% и митозы <2/10 HPF; G2 — Ki-67 3–20% или митозы 2–20/10 HPF; G3 — Ki-67 >20% или митозы >20/10 HPF; NEC (мелкоклеточный/крупноклеточный) — митозы >20/10 HPF.

Контроль качества в патологоанатомической лаборатории

Стандарты ISO 15189 для медицинских лабораторий требуют внешнего (EQA) и внутреннего контроля качества ИГХ. Обязательны положительный и отрицательный контроль на каждом стекле. Для HER2 — верификация с ISH при 2+. Программа EQA UKNEQAS, NordiQC, ROSQUA обеспечивают межлабораторную сопоставимость.

Для Ki-67 рекомендуется автоматизированный анализ изображений (AI-платформы: Indica Labs HALO, Visiopharm, PathAI) для снижения вариабельности между наблюдателями (inter-observer variability), которая при ручном подсчёте достигает 20–30%.

Фиксация и преаналитический этап

Преаналитический этап определяет до 70% ошибок в гистологии. Критические параметры: время «игла до фиксатора» (<1 часа по стандарту CAP), pH формалина (6.8–7.2), концентрация (10% нейтральный буферизованный), температура (комнатная). Холодовая ишемия тканей активирует протеазы и нуклеазы — РНК деградирует в течение часов. Для молекулярных исследований (ПЦР, FISH, NGS на FFPE) критична документация времени фиксации.

Практические советы гистолога

💡

При H&E дифференцировка 1% HCl — не более 5–10 секунд, иначе гематоксилин вымывается полностью.

🔴

Для PAS обязательна диастазная контрольная секция — отличает гликоген от других ШИК+ веществ.

🧊

Цитратный буфер pH 6.0 при 98°C 20 мин — универсальный старт для ИГХ демаскировки большинства антигенов.

📏

Минимальный объём фиксатора — 10:1 к объёму ткани. Для кусочка 10×10×5 мм нужно ≥5 мл формалина.

⚗️

Антитела хранить при +4°C в темноте; не замораживать, если нет специального указания производителя.

📊

При Ki-67 подсчитывать в «горячем пятне» (hotspot) — зоне наибольшей плотности Ki-67-позитивных ядер, ≥500 клеток.

🎯

Митотические фигуры считать только типичные: пластинка экватора, звезда, кольцо. Апоптоз — не митоз.

🛡️

Блокировка эндогенной пероксидазы 0.3% H₂O₂ в метаноле — 10 мин. Для богатых кровью тканей — 0.6%.

Как пользоваться калькулятором

1
Выберите нужный инструмент
Переключайтесь между вкладками: подсчёт клеток, митотический индекс, Ki-67, площадь среза, таймер окраски, время фиксации, разведение антител или справочник тканей.
2
Введите данные
Заполните поля калькулятора. Все поля с числами принимают десятичные дроби. Выпадающие списки содержат стандартные значения для микроскопии.
3
Получите результат
Результаты рассчитываются мгновенно при вводе. Для митотического индекса и Ki-67 отображается клиническая интерпретация.
4
Используйте таймер
Во вкладке «Таймер окраски» выберите протокол (H&E, PAS, Маccон или ИГХ), нажмите «Старт» рядом с нужным шагом — таймер считает в обратном направлении.
5
Изучайте справочник
Вкладка «Типы тканей» содержит характеристики и ИГХ маркеры для 17+ типов тканей с поиском по маркеру или локализации.

Часто задаваемые вопросы

Митотический индекс (МИ) — отношение числа клеток в митозе к общему числу подсчитанных клеток, выраженное в процентах. МИ = (число митозов / всего клеток) × 100%. В патологоанатомической практике МИ оценивается как число митозов на 10 полей зрения при объективе ×40 (10 HPF). Значения выше 4–10/10 HPF в зависимости от локализации опухоли являются прогностически неблагоприятным признаком. МИ — один из критериев гистологической степени злокачественности (grade) опухолей молочной железы, мягкотканных сарком и нейроэндокринных опухолей.

Митотический индекс оценивает только клетки, находящиеся в митозе (M-фаза), тогда как Ki-67 маркирует все делящиеся клетки во всех активных фазах клеточного цикла — G1, S, G2 и M. Поэтому Ki-67 всегда выше МИ. Ki-67 определяется иммуногистохимически с антителом MIB-1 и считается более чувствительным и воспроизводимым показателем пролиферации. В клинической практике Ki-67 используется для стратификации риска при раке молочной железы (Luminal A <20%, Luminal B ≥20%), нейроэндокринных опухолях (G1 <3%, G2 3–20%, G3 >20%).

Для корректного подсчёта плотности клеток необходимо: 1) Использовать окулярную сетку (морфометрическую решётку) или программную разметку; 2) Подсчитывать не менее 5–10 полей зрения в репрезентативных зонах; 3) Придерживаться одного объектива (стандарт — ×40, диаметр поля ~0,45 мм); 4) Избегать зон некроза и краёв среза; 5) Для стереологии использовать метод точечного подсчёта (point counting) по принципу Делесса: Vv = P+ / Pt. Для Ki-67 рекомендуется подсчёт ≥500 клеток в «горячем пятне» (hotspot).

Правильная фиксация критически важна для качества ИГХ и молекулярных исследований. Недофиксация приводит к аутолизу и потере антигенности; перефиксация — к избыточному образованию метиленовых мостиков, маскирующих эпитопы антигенов. По рекомендациям CAP/ASCO (для рака молочной железы) оптимальное время фиксации в 10% нейтральном буферизованном формалине — от 6 до 72 часов при комнатной температуре. Скорость проникновения 10% формалина составляет ~1 мм/ч. Для ИГХ с антителами к ER, PR, HER2 время фиксации нормируется строго.

Разведение антитела рассчитывается по формуле C₁V₁ = C₂V₂, где C₁ — концентрация стокового раствора, V₁ — объём стока, C₂ — рабочая концентрация, V₂ — конечный объём. Например, для антитела 1 мг/мл при рабочем разведении 1:100 и объёме 1 мл: V₁ = (0.01 × 1) / 1 = 0.01 мл (10 мкл). Рабочие разведения обычно указаны в паспорте антитела, но требуют подбора (тайтрования) для конкретной ткани и протокола демаскировки. Рекомендуется начинать с 1:100 для поликлональных и 1:200–1:500 для моноклональных антител.

Фиксация формалином создаёт метиленовые мостики между белками, что блокирует антигенные детерминанты. Демаскировка (тепловая активация эпитопов, HIER) восстанавливает антигенность путём нагрева среза в буферном растворе. Наиболее распространены: цитратный буфер pH 6.0 (оптимален для большинства антигенов — Ki-67, ER, PR, CD3, CD20), EDTA-буфер pH 8–9 (для HER2, p53, MDM2). Кипячение в микроволновой печи или автоклаве при 95–125°C в течение 10–20 минут — стандартный протокол. Неправильная демаскировка — наиболее частая причина слабого окрашивания.

PAS (Periodic Acid-Schiff) или ШИК-реакция выявляет полисахариды, мукополисахариды, гликопротеины и гликолипиды, окрашивая их в малиново-красный цвет. Позитивная ШИК-реакция наблюдается в: гликогене (печень, мышцы — разрушается диастазой для дифференциации), слизи (бокаловидные клетки ЖКТ), базальных мембранах (клубочки, канальцы), грибках (диагностика аспергиллёза, гистоплазмоза). Диастаза-ШИК позволяет различить гликоген (ДиастазаPAS-) и другие ШИК-позитивные вещества. Важно при диагностике гликогенозов, болезни фон Гирке, болезни Помпе.

Скелетная мышечная ткань: поперечная исчерченность, периферически расположенные ядра, большой диаметр волокон (50–100 мкм). Сердечная мышца: поперечная исчерченность, центральные ядра, вставочные диски (PAS+, desmin+). Гладкая мышца: нет исчерченности, веретенообразные клетки с центральными ядрами, пучки с перекрещивающейся ориентацией. ИГХ: α-ГМА (SMA) маркирует гладкую мышцу и миофибробласты; десмин — все типы мышц; тропонин T/I специфичен для сердечной мышцы. Маллори и Массон окрашивают коллаген (синий) vs мышцу (красный).

Стереология — раздел морфометрии, позволяющий по двумерным срезам получить количественную информацию о трёхмерных структурах. Основной принцип — Делесс (1847): объёмная доля структуры (Vv) равна её площадной доле (Aa) и точечной плотности (Pp): Vv = Aa = Pp. Метод точечного подсчёта: накладывают тест-сетку, считают точки, попавшие на структуру (P+) и всего (Pt); Vv = P+/Pt. Применяется для оценки объёма органелл, объёма опухолевой стромы, степени фиброза. Программы: ImageJ/Fiji + плагин Cell Counter, Stereo Investigator.

Гематоксилин-Эозин (Г&Э): универсальная рутинная окраска. Ядра — синие (гематоксилин), цитоплазма и коллаген — розовые (эозин). Недостаток: коллаген и цитоплазма плохо различимы. Окраска по Массону (Маллори-Голднер): ядра — чёрные (железный гематоксилин), мышцы — красные (кислый фуксин/понсо), коллаген — синий или зелёный (Aniline Blue/Fast Green). Незаменима для оценки фиброза (цирроз печени, кардиосклероз, фиброз лёгких — стадирование по Кноделю/Метавир/Батлеру), а также в дерматопатологии и при опухолях мягких тканей.

Создатель

Лиана Арифметова

Миссия: Демократизировать сложные расчеты. Превратить страх перед числами в ясность и контроль. Девиз: «Любая повторяющаяся задача заслуживает своего калькулятора».

⚖️

Отказ от ответственности

Только для информационных целей. Все расчёты, результаты и данные, предоставляемые данным инструментом, носят исключительно ознакомительный и справочный характер. Они не являются профессиональной консультацией — медицинской, юридической, финансовой, инженерной или иной.

Точность результатов. Калькулятор основан на общепринятых формулах и методиках, однако фактические результаты могут отличаться в зависимости от индивидуальных условий, исходных данных и применяемых стандартов. Мы не гарантируем полноту, точность или актуальность приведённых расчётов.

Медицинские, финансовые и профессиональные решения должны приниматься исключительно на основании консультации с квалифицированными специалистами — врачом, финансовым советником, инженером или другим профессионалом в соответствующей области. Не используйте результаты данного инструмента как единственное основание для принятия важных решений.

Ограничение ответственности. Авторы и разработчики сервиса не несут никакой ответственности за прямой или косвенный ущерб, возникший в результате использования данных расчётов. Пользователь принимает на себя всю ответственность за интерпретацию и применение полученных результатов.

Калькулятор гистологии

Калькулятор гистологии

Подсчёт клеток на поле зрения

Основы гистологии: что нужно знать

Морфометрия

Пролиферативная активность

Иммуногистохимия (ИГХ)

Стереология

Гистология в клинической практике

Степень злокачественности и пролиферация

Контроль качества в патологоанатомической лаборатории

Фиксация и преаналитический этап

Практические советы гистолога

Как пользоваться калькулятором

Часто задаваемые вопросы

Лиана Арифметова

Отказ от ответственности

Похожие инструменты

Медицинский калькулятор: риски, дозы, вакцинация

Калькулятор палеонтологии

Калькулятор чисел Фибоначчи

Калькулятор типографики: Type Scale, межстрочный, Fluid Typography

Калькулятор газы (PV=nRT): идеальный газ и Ван-дер-Ваальс

Генератор случайных чисел

Универсальный конвертер единиц: длина, вес, объем

Калькулятор производства: расход, выход, себестоимость

Калькулятор фитотерапии: лекарственные растения, настои, настойки и сборы

Инвестиционный калькулятор (валюты, APR/APY, облигации)

Калькулятор преобразования Лапласа

Калькулятор площади поражения кожи (PASI, SCORAD)

Калькулятор точки росы

Универсальный калькулятор дозировок

Шкала SOFA — калькулятор сепсиса

Калькулятор гистологии

Подсчёт клеток на поле зрения